Recherche Avancée

Thèse soutenue

Dynamique de la réplication et instabilité génétique chez les mammifères

FR  |  
EN
Auteur / Autrice : Sylvain Courbet
Direction : Michelle Debatisse
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génétique
Date : Soutenance en 2008
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

FR

J’ai analysé la cinétique de re-programmation des paramètres de réplication en fonction de la taille des pools de nucléotides, ou en traitant les cellules avec de l’aphidicoline. J’ai ainsi pu démontrer que la densité des évènements d’initiation et l’efficacité relative des origines sont directement liées à la vitesse de progression des fourches de réplication. Plus précisément au niveau du locus AMPD2 du hamster Chinois, j’ai montré que la présence d’une origine de forte efficacité, oriGNAI3, reflête la chronologie d’activation des origines du locus. Ainsi, avec une progression des fourches rapide, le déclenchement de l’origine la plus précoce du domaine conduit à la réplication passive des origines voisines qui n’ont pas encore reçu le signal d’activation. De plus, j’ai pu mettre en évidence une corrélation entre la vitesse de réplication au cours d’une phase S donnée et la taille des boucles de chromatine lors de la phase G1 suivante. La taille de ces boucles est définie par l’espacement des séquences d’ADN ancrées à la matrice nucléaire. Les sites d’ancrage potentiels à la matrice (MARs) du locus AMPD2 colocalisent avec les origines de réplication cartographiées par peignage. J’ai montré que lorsque les fourches progressent à vitesse élevée et qu’oriGNAI3 est l’origine majeure du domaine, les boucles sont de grande taille et seule oriGNAI3 est attachée à la matrice. En revanche, lorsque les fourches progressent lentement et que les évènements d’initiation sont distribués de façon égale entre les 6 origines potentielles du locus, la taille des boucles diminue considérablement, et l’ensemble des origines apparaît ancré. Mes résultats offrent ainsi un nouvel éclairage sur les mécanismes contrôlant la hiérarchie des origines, qui reposerait sur leur affinité relative pour la matrice nucléaire, une structure cellulaire souvent considérée comme un support fonctionnel de la réplication.