Thèse soutenue

Protocoles analytiques pour l'étude de la vanilline par RMN 13C isotopique en abondance naturelle : reproductibilté méthodologique, purification, origines du fractionnement isotopique
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Auteur / Autrice : Eliot-Patrick Botosoa
Direction : Gérald RemaudRichard J. Robins
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie analytique
Date : Soutenance en 2008
Etablissement(s) : Nantes
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale chimie biologie (Nantes)
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Nantes. Faculté des sciences et des techniques

Résumé

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La nouvelle méthodologie RMN 13C pour mesurer les teneurs en 13C site par site en abondance naturelle a permis d'envisager l'étude des mécanismes de biotransformation de l'acide férulique en vanilline. Dans un premier temps, il a fallu montrer que la RMN 13C donnait accès à des données fiables. Une étude de reproductibilité interne a été entreprise, ce qui a contribué à l'identification des points les plus sensibles de la méthode. Puis durant l'investigation des méthodes de purification des molécules sondes, des fractionnements isotopiques 13C normaux et inverses, ont été observés durant la chromatographie sur phase normale. Cette étude participe à la compréhension des effets isotopiques non-covalents. Un protocole analytique, permettant de limiter l'impact du fractionnement isotopique a été proposé. Enfin, la détermination de la filiation isotopique entre le substrat acide férulique et le produit vanilline a mis en évidence que l'intermédiaire "hydroquinone" est vraisemblablement l'étape commune aux deux micro-organismes étudiés (Streptomyces setonii et Amycolatopsis sp. ). Une modélisation par calculs d'énergie appuie les données 13C obtenus. Une double perspective du travail de thèse est envisagée: (i) les effets isotopiques non-covalents étudiés par RMN 13C peuvent se transposer, par exemple, à l'étude de l'interaction entre des polluants et des sols contaminés, (ii) une méthodologie générale basée sur la RMN 13C isotopique peut devenir la technique de référence pour caractériser le statut naturel de la vanilline