Auteur / Autrice : | Juan Simon Assad Garcia |
Direction : | Jean Guzzo, Cosette Grandvalet |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences de l'alimentation. Microbiologie et biologie moléculaire |
Date : | Soutenance en 2008 |
Etablissement(s) : | Dijon |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Oenococcus oeni est une bactérie lactique impliquée dans la fermentation malolactique (FML) des vins. L’initiation de la FML liée à la croissance de O. Oeni, reste une des étapes la moins bien maîtrisée lors de la vinification du fait des stress imposés par le moût fermenté. L’optimisation des levains malolactiques nécessite l’étude des mécanismes cellulaires mis en jeu au cours de l’adaptation de O. Oeni en milieu vin. Ainsi, la mutagenèse dirigée apparaît indispensable pour étudier in situ ces mécanismes. L’utilisation de vecteurs suicides nécessitant une technique de transfert génétique de fréquence optimale, une amélioration des techniques existantes a été recherchée. L’optimisation de la conjugaison du vecteur pGID052 entre L. Lactis et O. Oeni a été appréhendée par l’application de diverses conditions visant à perturber les barrières du transfert génétique. Le taux de transfert a été amélioré en maintenant les partenaires de conjugaison à 40°C (10 fois) ou par addition de concentrations sub-létales d’érythromycine (7 fois). Une technique de transfert génétique par électroporation a également été développée pour cette bactérie antérieurement réfractaire à cette méthode. L’ajout d’éthanol dans le tampon d’électroporation en tant qu’agent fluidifiant membranaire a été nécessaire pour l’obtention de transformants. A l’aide de cette technique, nous avons introduit un gène tronqué chez O. Oeni détectant pour la première fois le produit de son expression. En parallèle, une étude transcriptionnelle du gène cfa de O. Oeni a été réalisée. Cette étude a permis de caractériser la région promotrice de ce gène et montre qu’il est sous le contrôle d’un seul facteur sigma.