Spécificité de substrat des lipases et rôle du volet amphiphile dans la reconnaissance stéréosélective des acylglycérols

Substrate specificity of lipases and role of amphiphilic lid in the stereoselective recognition of acylglycerols

• Auteur / Autrice : Jorge Alberto Rodriguez Gonzalez
• Direction : Frédéric Carrière
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie organique. Chimie moléculaire et molécules bioactives
• Date : Soutenance en 2008
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

Modèles mathématiques

Glycérides

Hydrolyse

Lipases

Résumé

Pour identifier les mécanismes de stéréopréférence des lipases envers les acylglycérols (pro)chiraux, nous avons développé une méthode de dérivatisation des diacylglycérols chiraux, issus de l’hydrolyse de triacylglycérols prochiraux, permettant de les quantifier par CLHP chirale et de déterminer l’excès énantiomérique parallèlement à l’évolution des produits de lipolyse. Cette méthode, validée avec des lipases possédant différentes stéréopréférences, et un modèle mathématique, estimant les constantes de spécificité et les préférences relatives de substrats, ont été utilisés pour déterminer le rôle du volet amphiphile contrôlant l’accès au site actif de la lipase pancréatique humaine. L’implication du volet dans la stéréosélectivité pour la position sn-1 des triacylglycérols a été démontrée et sa délétion supprime cette préférence. La synthèse d’un triacylglycérol avec un acide α-éléostéarique en position sn-2 permet d’étudier la spécificité des lipases pour cette position.

To identify the mechanisms of stereopreference of lipases against (pro)chiral acylglycerols, we have developed a method of derivatization of chiral diacylglycerols, from the hydrolysis of prochiral triacylglycerols, to quantify by chiral HPLC and to determine the enantiomeric excess in parallel with the evolution of lipolysis products. This method, validated with lipases having different stereopreferences, and a mathematical model, to estimate the specificity constants and the relative preferences of substrates, were used to determine the role of amphiphilic lid that control the access to the active site of human pancreatic lipase. The implication of lid in the stereoselectivity for the sn-1 position of triacylglycerols has been demonstrated and its deletion removes this preference. The synthesis of a triacylglycerol with an acid α-eleostearic at sn-2 position allows studying the specificity of lipases for this position.