Développement de nouvelles approches méthodologiques en Chromatographie de Partage Centrifuge en vue de la purification de molécules d’intérêt

Development of new methodological approaches in centrifugal partition chromatography for the purification of bioactive metabolites

• Auteur / Autrice : Alix Toribio
• Direction : Jean-Marc Nuzillard, Jean-Hugues Renault
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacie. Pharmacognosie
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Reims

Mots clés

Mots clés contrôlés

Tumeurs

Glucosinolates

Chromatographie

Chromatographie d'échange d'ions

Maladie d'Alzheimer

Résumé

Dans la partie introductive de ce mémoire, un historique de la chromatographie et des techniques de chromatographie liquide-liquide dites à contre-courant (CLLCC) permet d’apporter des éléments de réflexion sur la prise de pouvoir des techniques de chromatographie sur support solide au détriment de la CPC. Puis, le principe de cette dernière et l’appareillage sont décrits. Les deux parties suivantes consacrées aux travaux personnels traitent des exemples d’applications et de développement des deux principaux modes de développement de la CPC. Ainsi, le mode de développement par élution a été utilisé pour la purification de molécules antifongiques issues d’une souche d’actinomycète subsaharienne agissant contre « la pourriture grise » de la vigne (Botrytis cinerea). Par ailleurs, le développement d’une méthode fondée sur l’inversion successive du rôle des phases liquides en mode par élution isocratique, nous a conduit à l’introduction de la chromatographie de partage centrifuge en mode dual multiple (MDM CPC). Cette méthode voit son application essentiellement dans la purification de mélange de composés binaires tels qu’obtenus parfois en synthèse organique. Le mode de développement par déplacement à quant à lui été employé lors de l’isolement d’alcaloïdes (Cryptocarya oubatchensis, Huperzia serrata) par pH Zone Refining, de glucosinolates (Brassicaceae et Caricaceae), d’acide rosmarinique (Lavandula vera) et d’anthocyanes (baies de raisins) par échange d’ions fort. Dans cette partie, des outils méthodologiques ont pu être développés afin de résoudre les problèmes souvent rencontrés lors de la purification de molécules en mode par déplacement en CPC.

@In the introductive part of this thesis, the historical aspect of the liquid-liquid countercurrent chromatographic techniques (CLLCC) is developed. Elements of reflexion on the catch of being able of the techniques of chromatography on solid support toward the centrifugal partition chromatography (CPC) are exposed. Then principle of CPC is described. The two following parts deals with examples of development of the two major modes of use in CPC. Indeed, the elution mode has been used to purify antifungal molecules, which defend grapevine against “gray rot” (Botrytis cinerea), from Actinomycete sp. Extract. Furthermore, the succession of dual mode (i. E. Inversion of stationary and mobile phase) allowed us to introduce a semi-continuous process named Multiple Dual Mode in CPC (MDM CPC). This original elution mode, employed for the rapid and easy purification of synthetic molecules, can only be achieved because both chromatographic phases are liquids. Thanks to the displacement mode, we described purification and isolation of alkaloids (from Cryptocarya oubatchensis and Huperzia serrata) by pH-Zone Refining, of glucosinolates (from five Brassicaceae and one Caricaceae), rosmarinic acid (from Lavandula vera) and anthocyanins (from grapes) by strong ion-exchange method. In this part, methodological aspects have been developed so as to solve problems encounter in displacement mode CPC.