La divercine V41, une bactériocine de classe IIa produite par Carnobacterium divergens V41 : développement d'outils moléculaires et expression hétérologue chez E. coli

par Christelle Richard

Thèse de doctorat en Microbiologie moléculaire et biochimie

Sous la direction de Hervé Prevost.

Soutenue en 2004

à Nantes , dans le cadre de École doctorale chimie biologie (Nantes) .


  • Résumé

    Carnobacterium divergens V41, qui inhibe Listeria monocytogenes dans le saumon fumé, produit la divercine V41. Dans l'objectif d'étudier cette bactériocine de classe IIa, différents outils ont été mis en place. La production d'anticorps polyclonaux contre la divercine V41 a permis sa détection spécifique et sensible ainsi que sa purification par immunoaffinité. L'isolement d'une souche mutante de C. Divergens V41 (C. Divergens V41C9) a permis de démontrer que l'inhibition de L. Monocytogenes dans le saumon fumé par C. Divergens V41 était due à la divercine V41. L'analyse statistique du spectre d'action des bactériocines de classe IIa a mis en évidence la corrélation entre leur nombre de ponts disulfures et leur spectre d'activité. Un système d'expression hétérologue de la divercine V41 dans E. Coli à partir d'un gène synthétique a été développé avec succès. La divercine V41 recombinante dont les deux ponts disulfures sont reformés est pure, soluble et active contre Listeria.


  • Résumé

    Carnobacterium divergens V41 which inhibits Listeria monocytogenes in smoked salmon, produces divercine V41. To study this class IIa bacteriocin, various tools were set up. Polyclonal antibodies generated against divercin V41 allowed its specific and significant detection and its purification by immunoaffinity. A mutant strain of C. Divergens V41 (C. Divergens V41C9) showed that L. Monocytogenes inhibition in salmon smoked by C. Divergens V41 was due to divercin V41. Statistical analysis of inhibition spectrum of class IIa bacteriocins highlighted important correlation between their number of disulfide bridges and their spectrum. Heterologous expression of divercin V41 in E. Coli with a synthetic gene was successfully developed. The recombinant divercin V41 whose two disulfide bridges, were reformed, was pure, soluble and active against Listeria.

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Informations

  • Détails : 203 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 176-203

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