Développement d'un test d'agglutination pour la détection, in situ, de la vitellogénine : biomarqueur de la contamination des écosystèmes aquatiques par oestrogènes mimétiques

Development of an agglutination test for the field detection of vitellogenin : biomarker of the aquatic ecosystem contamination by oestrogen mimics

• Auteur / Autrice : Ilizabete Magalhaes-Antoine
• Direction : Jaïro Falla-Angel, Jean-Claude Pihan
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Metz
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Laboratoire d' Immunologie-Microbiologie (Laboratoire ESE-CNRS, Unité FR2635 (Metz) - LBFE - Laboratoire biodiversité et fonctionnement des écosystèmes

Mots clés

Mots clés contrôlés

Anticorps monoclonaux

Agglutination -- Tests

Poisson -- Toxicologie

Estrogènes

Mots clés libres

Oestrogènes mimétiques

Féminisation des poissons

Vitellogénine

Test d'agglutination

Anticorps monoclonaux

Résumé

Les oestrogènes mimétiques sont des polluants présents dans l'environnement aquatique. Ces composés induisent des anomalies au niveau du système reproducteur des poissons mâles, aboutissant à une féminisation partielle ou totale des mâles ou bien à leur démasculinisation. Finalement, ces altérations peuvent conduire à la disparition des espèces piscicoles touchées. De plus, ces toxiques possèdent la capacité de mimer les oestrogènes endogènes et d'induire la production anormale de vitellogénine chez les poissons mâles et immatures. L'objectif de ce travail est de développer une méthode simple, spécifique et rapide, pour détecter in situ, la contamination des poissons mâles par les oestrogènes mimétiques, utilisant comme biomarqueur la VTG. La méthode sélectionnée est basée sur un test d'agglutination, mis au point avec des anticorps monoclonaux spécifiques de ce biomarqueur. Le développement de ce test VTG-LAT, a impliqué la mise au point d'une nouvelle méthode de purification de la VTG de carpe dans le but de produire des anticorps monoclonaux spécifiques de cette protéine. De plus, il a été nécessaire d'optimiser le processus d'adsorption des anticorps monoclonaux sur les billes de latex en terme de taille de billes, de pH et de concentrations en anticorps. L'optimisation du - processus d'immunoagglutination a également été étudiée. Le test d'agglutination VTG-LAT développé possède la capacité de reconnaître les différentes molécules de VTG de plusieurs espèces de poissons (vandoise, chevesne, gardon, perche. . . ) et il est également possible avec cette méthode de différencier les femelles en vitellogenèse des poissons contaminés par des oestrogènes mimétiques

Estrogen mimics are pollutants present in aquatic environment. These compounds induce abnormalities in the reproductive system of male fishes, which lead to a total or partial male feminization, or to their demasculinization. Finally, these alterations could lead to a disappearance of the total contaminated fish populations. Moreover, these toxics possess the capacity to mimic endogenous estrogens and to induce the abnormal production of vitellogenin (VTG) in male and immature fishes. The purpose of this research was to develop an easy, specific and fast method for the field detection of male fish contamination by estrogen mimics, using VTG as biomarker. The selected method is based on a latex agglutination test (LAT), developed with monoclonal antibodies specific of this biomarker. The development of this VTGLAT, has involved a new purification method of carp VTG in order to produce monoclonal antibodies specifics of this protein. Moreover, it was necessary the optimization of the antibodies adsorption process in terms of particle diameters, pH and antibodies concentration. The optimization of irnrnunoagglutination process was also verified. The VTG-LAT developed possess the capacity to recognize different VTG molecules of several fish species (dace, chub, roach, perch. . . ) and it is possible by this method to differentiate vitellogenic females from contaminated fishes by estrogen mimics