Les neurones sensoriels myentériques : étude in situ par la technique de Patch Clamp

par François Rugiero

Thèse de doctorat en Neusrosciences

Sous la direction de Nadine Clerc et de Maurice Gola.

Soutenue en 2003

à Aix-Marseille 3 .

mots clés

• Neurones sensitifs
• Patch-clamp, Technique du
• Cochon d'Inde -- Animaux de laboratoire
• Duodénum

Résumé

Les principaux courants ioniques des neurones myentériques AH in situ ont été étudiés en patch clamp dans le duodenum de cobaye. Ih régule la résistance d'entrée des neurones AH. La conotoxine GVIA, mais pas l'agatoxine IVA, abrège le potentiel d'action et bloque l'AHP qui est donc couplée aux canaux Ca2+ de type N. Nous avons aussi découvert un courant Na+ résistant à la TTX (TTX-R INa). TTX-R INa s'active et s'inactive lentement et possède une composante persistante. La substitution du Cl-intracellulaire par le F- hyperpolarise les paramètres dépendants du voltage de TTX-R INa, lui conférant les propriétés de NaN/NaV1. 9 dans les DRG. Des expériences de RT-PCR, single cell RT-PCR et immunohistochimie indiquent que l'ARNm et la sous-unité NaV1. 9 sont présents dans les neurones AH. Dans les neurones AH, NaN présente aussi une inactivation originale associant une diminution ultra lente ( max=100 s) de NaN à un ralentissement des cinétiques d'activation (m) et d'inactivation (hf).

Titre traduit

Myenteric sensory neurons : an in situ Patch Clamp study

Résumé

Whole-cell patch-clamp recordings from guinea pig duodenal myenteric neurons were used to study the major currents of AH neurons in situ. Ih contributes to the resting conductance. The conotoxin GVIA, but not the agatoxin IVA, shortens the action potentials and blocks the AHP, which is then coupled to N- type Ca2+ channels. AH neurons express a previously unreported, TTX-resistant Na+ current (TTX-R INa). TTX-R INa activates and inactivates slowly and exhibits a persistent component. Substituting intracellular F- for Cl- shifts the voltage-dependent parameters of TTX-R INa leftward, confering TTX-R INa the properties of NaN/NaV1. 9 in the DRGs. Consistently, RT-PCR, single-cell profiling and immunostaining detect NaV1. 9 mRNA and subunits in AH neurons. In AH neurons, NaN also displays an original inactivation associating an ultra slow ( max=100 s) decline of NaN with a slowing down of both activation (m) and fast inactivation (hf) kinetics.