L'ARN polymérase ARN dépendante du virus de l'Hépatite C (VHC) : expression et étude de son mécanisme d'action in vitro : recherche d'inhibiteurs

The RNA-dependent RNA polymerase of the Hepatitis C Virus (HCV) : expression and study on the mechanism of RNA synthesis in vitro : search for inhibitors

• Auteur / Autrice : Sandrine Reigadas
• Direction : Thérèse Astier Gin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et médicales. Biologie - Santé
• Date : Soutenance en 2002
• Etablissement(s) : Bordeaux 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

Acides nucléiques antisens

ARN polymérases

Oligonucléotides

Synthèse (chimie) -- Inhibiteurs

ARN

ARN -- Réplication

Virus -- Reproduction (biologie)

Virus de l'hépatite C

Thérapeutique

Hépatite C

Résumé

Le virus de l'hépatite C(VHC) est l'agent étiologique de la plupart des cas d'hépatites non-A non-B post-transfusionnelles ou sporadiques. Les traitements actuels proposés étant inefficace dans 50 % des cas, le développement de traitements anti-VHC nouveaux et spécifiques est donc nécessaire. Parmi les fonctions virales essentielles à la réplication virale, une des cibles les plus attractives pour le développement d'anti-viraux est l'étape de synthèse de l'ARN génomique assurée par l'ARN polymérase dépendante (NS5B) codée par le génome du VHC. Afin d'étudier l'initiation de la synthèse d'ARN à partir du génome du VHC, nous avons utilisé des ARN transcrits in vitro correspondant à l'extrémité 3' de l'ARN (-) et (+) comme matrices pour la synthèse d'ARN catalysée par la NS5B purifiée du VHC. Les résultats de ces expériences montrent que la capacité de synthèse de l'enzyme n'est pas la même suivant la matrice ARN utilisée, et que les 341 premiers nucléotides correspondant à l'extrémité 3' de l'ARN (-) sont les plus efficacement copiés par l(enzyme. L'importance et la forte conservation de cette région ARN nous a encouragé à développer une stratégie antisens afin d'obtenir des séquences oligonucléotidiques qui pourraient bloquer ou ralentir la réplication de l'ARN viral. Parmi les ODN complémentaires de l'extrémité 3' de l'ARN (-) testés, 4 inhibent la synthèse d'ARN avec un IC50 inférieure à 1 uM. Cette inhibition est séquence spécifique et l'introduction d'une modification 2'-O-méthyl ou phosphoramidate abaisse l'IC50 nM et 30 nM respectivement) d'environ 12 fois pour l'un des 4 ODN inhibiteurs, l'ODN7. Nos résultats suggèrent que l'ODN7 inhibent la synthèse d'ARN en interférant avec des motifs structuraux important pour une initiation efficace de la synthèse d'ARN, présents à l'extrémité 3' de l'ARN(-).