Developpement d'outils lipidiques partiellement perfluores pour la cristallisation bidimensionnelle de proteines. Application aux recepteurs de l'acide retinoique et a des proteines membranaires

par FRANCK LACH

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Charles Mioskowski.

Soutenue en 1999

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Ce manuscrit presente la synthese et la conception de nouveaux outils concus pour la cristallisation bidimensionnelle de proteines sur film lipidique specifique. Nous avons developpe, pour le cas particulier de proteines solubles a ligand hydrophobe (en l'occurence les recepteurs de l'acide retinoique) deux concepts originaux afin d'eviter l'insertion dans la monocouche d'un tel ligand greffe au support lipidique. Ces deux approches font intervenir respectivement des amphiphiles dits thermoambivalents (avec une temperature de transition de phase comprise entre 4 et 20\c) capables, a faible temperature, d'expulser mecaniquement le ligand de la monocouche et des lipides partiellement perfluores possedant un caractere suffisamment lipophobe pour contraindre le ligand a s'exprimer en phase aqueuse et rester accessible a la proteine. Les deux concepts ont ete valides et nous avons mis en evidence le premier exemple d'immobilisation a l'interface air/eau d'une proteine soluble a ligand hydrophobe. Cependant, jusqu'ici, nos tentatives de cristallisation bidimensionnelle d'un heterodimere rar/rxr ont abouti uniquement a la formation d'arrangements compacts de proteines. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons tente de tirer profit des proprietes de segregation de phases entre fluorocarbures et hydrocarbures, pour developper d'autres supports lipidiques fluores impermeables aux detergents, et ainsi, utilisables dans des protocoles de cristallisation bidimensionnelle de proteines membranaires sur film specifique. La bonne stabilite des amphiphiles prepares en presence de divers tensioactifs a pu etre determinee par ellipsometrie. Par ailleurs, cette technique a permis de montrer sans ambiguite l'adsorption rapide d'une proteine membranaire vegetale (une monooxygenase a cytochrome p450) sur un tel film d'amphiphiles partiellement fluores et nous avons recemment entrepris une serie d'experiences de cristallisation bidimensionnelle de deux enzymes a cytochrome p450 sur les supports lipidiques fluores synthetises.


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Informations

  • Détails : 271 p.
  • Annexes : 256 ref.

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