Immobilisation de biomolécules sur des surfaces conductrices

• Auteur / Autrice : Christophe Valat
• Direction : Jean-Louis Romette
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (1969-2011)

Résumé

Ce travail a eu comme objectif la mise au point d'une methode d'immobilisation covalente de biomolecules sur des electrodes imprimees, et leur utilisation dans deux applications de dosages utilisant une detection electrochimique. Ces electrodes sont obtenues par impression d'une encre conductrice a base de polystyrene et de graphite. Elles sont fonctionnalisees par oxydation, puis liees de facon covalente avec la molecule, ligand d'anticorps ou oligonucleotides en utilisant un reactif bi-fonctionnel. L'utilisation d'une surface conductrice permet la realisation d'un dosage electrochimique base sur le couplage de la detection de molecules redox avec l'activite d'enzymes. Les deux types de biomolecules immobilisees sont a la base des deux applications developpees dans ce travail, respectivement un immunocapteur et un capteur a adn dans la premiere application, l'immobilisation de proteine a a permis la capture d'anticorps sur les electrodes, et la realisation d'un dosage automatise de ces anticorps ainsi que la regeneration de la surface de capture. Les resultats obtenus ont demontres la stabilite de la proteine a immobilisee vis a vis du traitement de regeneration, ainsi que l'utilite de l'utilisation de la convection forcee pour accelerer les etapes de capture des anticorps sur la proteine a. Par ailleurs l'etude de l'affinite du capteur a proteine a vis a vis de differents isotypes d'anticorps, a permis la mise au point du dosage d'anticorps polyclonaux et monoclonaux, avec une limite de sensibilite de l'ordre d'une nm. Dans la deuxieme application etudiee, l'immobilisation de sondes oligonucleotidiques sur les electrodes imprimees a permis d'effectuer un dosage de molecules d'adn cibles, dans un test en microplaques utilisant alternativement une detection colorimetrique ou electrochimique. Cette etude a porte sur le choix d'une methode d'immobilisation, l'optimisation des parametres cinetiques de fixation covalente des oligonucleotides, et des conditions d'hybridation. Le dosage d'une molecule d'adn de 441 paires de bases marquee a la biotine a ete effectue et montre une limite de sensibilite de l'ordre de 10 pm dans le cas de l'utilisation de la detection colorimetrique et electrochimique.