Analyse fonctionnelle du promoteur majeur du gene humain de la choline acetyltransferase

Functional analysis of the major promoter of human choline acetyltransferase gene

• Auteur / Autrice : ESTELLE ESPINOS
• Direction : Michel Weber
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

Le gene chat code pour la choline acetyltransferase (chat), un marqueur specifique des neurones cholinergiques. Une regulation spectaculaire de ce gene est observee dans les neurones sympathiques lors de la mise en place du systeme nerveux peripherique. Les neurones, initialement noradrenergiques, acquierent un phenotype cholinergique au contact de leur cible d'innervation. Cette transition noradrenergique / cholinergique peut-etre reproduite in vitro dans des cultures primaires de neurones sympathiques en presence de certaines cytokines (cntf ou lif) mais aussi de butyrate de sodium. Une analyse fonctionnelle du promoteur majeur du gene chat humain a ete menee afin de localiser les elements responsables de la specificite d'expression de la chat et de sa regulation par le cntf et les agents hyperacetylants. Ce travail a debute par l'identification de deux nouveaux sites d'initiation de la transcription au niveau du promoteur m. La transfection transitoire de diverses lignees cellulaires par des constructions chat-luciferase a ensuite revele l'existence d'un nouvel element activateur fort localise dans l'exon m, actif dans des lignees neuronales cholinergiques comme dans une lignee non neuronale et non cholinergique. Apres avoir selectionne la lignee cellulaire ainsi que le mode de transfection permettant l'etude des mecanismes moleculaires impliques dans la regulation de l'expression du gene hchat par le cntf, un effet activateur du cntf sur le promoteur m a ete observe dans la lignee sk-n-be. L'implication des motifs stat presents dans la region etudiee a ete analysee. Des experiences de transfection ont par ailleurs montre que le promoteur m etait inductible par le butyrate ainsi que par deux autres inhibiteurs d'histone desacetylases. Cette activation necessite des phenomenes de phosphorylation : nous montrons l'importance, dans ce processus, de la voie map kinase mek/erk et d'une serine/threonine kinase sensible a h7.