Recherche Avancée

Thèse soutenue

Influence des impuretés sur la cristallisation d'une protéine modèle dans différents milieux

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Auteur / Autrice : Joachim Hirschler
Direction : Juan-Carlos Fontecilla-Camps
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Cristallographie et RMN biologiques
Date : Soutenance en 1997
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

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La cristallisation du lysozyme de dinde (ld) en presence du contaminant rajoute lysozyme de poule (lp, structure tridimensionnelle similaire) mene aux cristaux a morphologie raccourcie (meme symmetrie hexagonale). La selectivite d'interactions des molecules de lp avec les differentes faces du cristal de ld a ete demontree par des mesures de la cinetique de croissance. La spectrometrie de masses des cristaux dissous nous a montre que les taux du contaminant dans les cristaux sont tres eleves, en effet tres proches de ceux de la solution de depart. La modelisation basee sur l'analyse des contacts intramoleculaires a permis de largement reproduire les principaux aspects des observations experimentales. Repetant les memes experiences de contamination dans un milieu de cristallisation gelifie, le raccourcissement des cristaux s'avere moins important qu'en milieu non-gelifie. Le milieu gelifie etant considere comme modele pour les conditions en apesanteur, nous avons compare l'effet de lp sur la cristallisation de ld dans ces deux milieux. Les cristaux obtenus en microgravite montrent un l'effet contaminateur qui est intermediaire entre ceux dans les milieux non-gelifie et gelifie sur sol. Des futures experiences sont proposees pour mieux comprendre ces observations. Un projet des mesures detaillees de la mosaicite cristalline par la radiation synchrotron a ete aborde afin de mieux caracteriser les repercussions des differents milieux de cristallisation sur la qualite des cristaux proteiques. Les premiers resultats ont montre la fiabilite des telles mesures par cette demarche. En etudiant des phenomenes de nucleation, nous avons trouve que la filtration de la solution de ld peut empecher sa cristallisation par une retention des agents nucleateurs, dont la taille est d'environ 0. 17 m. Le milieu gelifie semble moins sensible a l'elimination de ces agents nucleateurs par la filtration.