La dimerisation de l'arn genomique du virus de l'immunodeficience humaine de type 1 (hiv-1) : etudes structurales et fonctionnelles

Dimerization of human immunodeficiency virus type 1 (hiv-1) genomic rna: structural and functional studies

• Auteur / Autrice : Jean-Christophe Paillart
• Direction : Bernard Ehresmann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La dimerisation de l'arn genomique est un processus ubiquitaire chez les retrovirus et represente une etape cle du cycle replicatif. Au cours de cette these, nous nous sommes interesses a l'identification de la region de dimerisation de l'arn genomique du virus de l'immunodeficience humaine de type 1 (hiv-1), a la caracterisation du mecanisme de dimerisation et a la fonction de cette etape dans le cycle retroviral. Nous avons montre par interference de modifications chimiques que le signal de dimerisation s'etend dans la region 5' leader et confirme par mutagenese dirigee que le site d'initiation de la dimerisation (dis) est contenu dans une structure en tige-boucle tres conservee. La boucle contient neuf nucleotides dont six sont autocomplementaires. Ces derniers, gugcac, sont responsable de l'interaction des deux arn monomeres tandis que les trois purines de part et d'autre de cette sequence ont un role structural determinant pour la cinetique de dimerisation. La realisation de mutants trans-complementaires a permis de montrer que le dimere d'arn de hiv-1 est limite a l'interaction des six nucleotides et que le complexe boucle-boucle (ou kissing complex) ainsi forme est dynamique et aisement deplacable par divers arn sens et antisens. La modelisation graphique indique que ce complexe est contraint et extremement dependant des nucleotides puriniques de la boucle. Enfin, apres construction de mutants du dis dans un clone moleculaire infectieux de hiv-1, nous avons pu montrer que la tige-boucle correspondant au dis joue un role preponderant dans le cycle replicatif de hiv-1. La mutation de cette structure provoque une perte d'infectivite de 10#3, resultat d'une diminution dans l'efficacite d'encapsidation et d'une alteration du deuxieme transfert de brin lors de la transcription inverse de l'arn genomique. Ainsi, le dis semble constituer une cible de choix pour une eventuelle approche therapeutique