Caractérisation d'une aquaporine d'insecte

Caracterisation of an insect aquaporin

• Auteur / Autrice : Françoise Le Caherec
• Direction : Jean Gouranton
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Rennes 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cicadelles

Aquaporines

Résumé

Les aquaporines permettent le passage rapide et selectif de l'eau a travers les membranes biologiques. Elles forment un sous-groupe fonctionnel dans une famille plus large de canaux transmembranaires, la famille mip (major intrinsic protein). Le travail presente dans cette these concerne l'etude d'une proteine membranaire p25, specifique des cellules epitheliales de la chambre filtrante de cicadella viridis (differenciation intestinale assurant l'evacuation rapide de l'eau chez les insectes homopteres). L'abondance de p25, son caractere intrinseque et sa localisation specifique laissent supposer que cette proteine peut etre responsable du transit d'eau. Des analyses d'images de microscopie electronique ont permis de conclure que p25 est organisee en tetramere. Nous avons confirme cette organisation tetramerique de p25 par des etudes hydrodynamiques apres extraction par le triton x-100. Suite a la mise au point d'un systeme d'integration de la proteine native dans la membrane plasmique d'ovocytes de xenope, nous avons demontre l'implication de p25 dans les transferts d'eau. P25 possede les caracteristiques fonctionnelles des aquaporines. Cette nouvelle aquaporine a ete nommee aqpcic. Par utilisation d'anticorps polyclonaux, nous avons mis en evidence la presence de proteines immunologiquement proches d'aqpcic dans les chambres filtrantes de six insectes homopteres. Il existe donc une correlation entre la presence de ces proteines aquaporines et la fonction de transfert d'eau dans les cellules epitheliales. Une banque d'adnc de chambre filtrante de cicadella viridis a ete construite. Apres criblage de cette banque avec un fragment pcr, obtenu a partir d'oligonucleotides derives des motifs npa, sequences caracteristiques de la famille mip, un clone positif de 2 kb a ete isole. Cet adnc code pour une proteine de masse moleculaire calculee de 26 kda et correspond a aqpcic. Sa sequence presente de 36 a 43% d'identite avec les aquaporines identifiees a ce jour. L'etude de la fonction d'aqpcic, par expression des transcrits dans les ovocytes de xenope, confirme l'etude realisee sur la proteine native. Aqpcic est un canal hydrique dont les caracteristiques sont similaires a celles d'aqp1, archetype des canaux hydriques. Aqpcic exclut l'uree, le glycerol et les ions. Aqpcic est la premiere aquaporine caracterisee chez les insectes