Isolement et caractérisation de nouveaux gènes impliqués dans l'absorption des stérols chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Isolation and characterization of new genes involved in sterol uptake in the yeast saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : Stéphane Bourot
• Direction : Francis Karst
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Poitiers

Mots clés

Mots clés contrôlés

Gènes

Mutation (biologie)

Hème

Mots clés libres

Sciences biologiques fondamentales et appliquees, psychologie

Résumé

Les mecanismes de trafic intracellulaire des sterols ne sont pas encore clairement etablis chez les eucaryotes. Afin de preciser les proteines impliquees dans ce transport, nous avons choisi d'etudier l'absorption des sterols chez la levure saccharomyces cerevisiae. Une premiere approche, basee sur la recherche de mutants affectes dans l'absorption des sterols, a permis l'isolement d'un mutant, sb281, incapable d'utiliser les sterols exogenes necessaires a la croissance en aerobiose contrairement a la souche parentale hem#- dont il derive. Les premiers essais de complementation fonctionnelle n'ont pas permis d'aboutir a l'isolement du gene implique dans ce phenotype, a l'aide de banques d'adn genomique classiques. Une deuxieme approche a permis l'identification de deux genes, sut1 et sut2, impliques dans l'absorption des sterols. Le gene sut1 a ete isole a partir de cellules de levure transformees par une banque d'adn genomique de saccharomyces cerevisiae construite dans un vecteur multicopies, se developpant sur un milieu contenant de l'ergosterol et un inhibiteur de la voie de biosynthese des sterols: le fenpropimorphe. Le gene sut1 a l'etat multicopies permet ; une absorption de #1#4c cholesterol regulee par les besoins cellulaire en sterols ; et en presence d'ergosterol dans le milieu la resistance a de nombreux inhibiteurs de la voie de biosynthese des sterols et la viabilite de souches erg#-. Ce gene est exprime en anaerobiose comme les genes hypoxiques et n'est pas indispensable pour l'absorption des sterols. Le gene sut2, identifie par homologie de sequence, permet a l'etat multicopies la resistance au fenpropimorphe des cellules cultivees en presence d'ergosterol. Les disruptions geniques de sut2 et sut1-sut2 sont sans consequences pour les cellules. Malgre les resultats obtenus, nous ne pouvons pas definir la fonction exacte de ces deux genes