Analyse du gène CFTR : application au diagnostic génotypique de la mucoviscidose et à l'étude des corrélations génotype-phénotype

Analysis of the CFTR gene : application for gentyoing and genotype-phenotype correlations in cystic fibrosis

• Auteur / Autrice : Bruno Costes
• Direction : Michel Goossens
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génétique
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 12

Mots clés

Mots clés contrôlés

Phénotype

Génotype

Mutation (biologie)

PCR (génétique)

Gène de la mucoviscidose

Résumé

La mucoviscidose est une maladie hereditaire de transmission autosomale recessive frequente dans les populations d'origine europeenne. Le gene dont les anomalies sont responsables de la mucoviscidose code pour une proteine canal cl#- appelee cftr (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator). Afin de savoir si la grande variabilite clinique qui caracterise la maladie est la consequence de defauts moleculaires precis, nous avons cherche a determiner l'ensemble des mutations du gene cftr par la technique dgge (denaturing gradient gel electrophoresis) chez des patients atteints de mucoviscidose. Nous avons ameliore cette methode de detection des mutations afin de reduire le temps et le cout de l'analyse des 27 exons du gene. Nous avons developpe un systeme permettant l'amplification par pcr puis l'analyse simultanee de plusieurs exons (analyse multiplex), et nous avons propose de substituer les amorces pcr/gc-clamp, souvent indispensables a l'efficacite de la technique dgge, par des amorces pcr liees a un derive de psoralene (le chemiclamp). Ces ameliorations techniques nous ont permis de caracteriser rapidement un nombre important de nouvelles mutations, et d'etre en mesure de detecter les mutations de 95% des chromosomes porteurs d'un defaut du gene cftr. Ces developpements ont ete appliques aussi bien au diagnostic de la mucoviscidose qu'a la recherche clinique. Nous avons pu evaluer la faisabilite d'un depistage neonatal de la mucoviscidose fonde sur la recherche des mutations du gene apres le dosage de la trypsine immunoreactive. Puis, nous avons entrepris une etude des correlations genotype-phenotype dans certaines formes dites frontieres de la mucoviscidose. Nos resultats, s'ajoutant a ceux de la litterature, ont confirme que les lesions moleculaires du gene cftr etaient responsables d'une forme de sterilite masculine par absence bilaterale congenitale des canaux deferents (abcd). Nous avons etabli le spectre des mutations du gene cftr rencontrees dans ces formes tres frustes de la maladie et precise la nature des associations d'alleles anormaux cftr qui rendent compte de ces formes