Caractérisation d'une nouvelle protéine des membranes basales : l'antigène GDA-J-F3

Characterization of a new protein of basement membranes: the gda-j/f3 antigen

• Auteur / Autrice : Barbara Gayraud
• Direction : Monique Aumailley, Leena Bruckner-Tuderman
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Monique Aumailley
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Leena Bruckner-Tuderman

Mots clés

Mots clés contrôlés

Hémidesmosomes

Cellules épithéliales

Fibroblastes

Kératinocytes

Anticorps monoclonaux

Protéines de la matrice extracellulaire

Membrane basale

Mots clés libres

Sciences biologiques fondamentales et appliquees, psychologie

Résumé

En utilisant l'anticorps monoclonal gda-j/f3, nous avons caracterise un nouvel antigene des membranes basales sous jacentes aux epithelia pluristratifies. Par immunofluorescence indirecte, l'anticorps gda-j/f3 montre une fluorescence lineaire strictement localisee a la jonction dermo-epidermique. Par microscopie electronique, l'epitope est localise aux points d'insertion des fibrilles d'ancrage dans la lamina densa. L'antigene est different du collagene de type vii, le composant structural majeur des fibrilles d'ancrage, puisque l'anticorps gda-j/f3 ne reagit pas in vitro avec le collagene de type vii purifie. Dans des cultures cellulaires sans serum, l'antigene est exprime par les keratinocytes humains normaux, les lignees cellulaires epitheliales et dans une moindre mesure par les fibroblastes dermiques humains. L'immunoprecipitation de milieu metaboliquement marque, par les keratinocytes ou des cellules de type epitheliales, avec l'anticorps gda-j/f3, montre deux polypeptides qui migrent en sds-page, a une masse moleculaire de 46 et 50 kda, dans des conditions non reductrices. Dans les gels realises en presence d'un agent reducteur, seul un polypeptide de 50 kda est observe. L'antigene est resistant au traitement enzymatique par la collagenase bacterienne, mais sensible a la trypsine et a la pepsine. Cet antigene montre une affinite pour l'heparine et la deae-cellulose dans des conditions de faible force ionique et de ph alcalin. Ces donnees indiquent que l'antigene gda-j/f3 est une petite proteine globulaire contenant des ponts disulfures, avec un potentiel d'interagir avec les proteoglycannes des membranes basales. L'integration de l'antigene gda-j/f3 dans l'architecture de la jonction dermo-epidermique est dependante de la presence du collagene de type vii, puisque l'anticorps est absent chez certains patients atteints d'une pathologie cutanee hereditaire, l'epidermolyse bulleuse dystrophique, caracterisee par l'absence du collagene de type vii et des fibrilles d'ancrage