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Les histones H2A, H2B, H3 et H4 : préparation, fragments, structure secondaire, immunologie, interaction avec l'ADN, acétylation
| Auteur / Autrice : | Maurice Couppez |
| Direction : | Pierre Sautière |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Sciences de la vie |
| Date : | Soutenance en 1996 |
| Etablissement(s) : | Lille 1 |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Les histones constituent, abstraction faite de l'eau, environ le tiers de la masse du noyau ; ce sont des constituants intrinsèques de la chromatine. Nous avons décrit cette dernière sous son aspect statique (composition, structure) et sous son aspect fonctionnel (réplication, mitose, différentiation, transcription). Une attention particulière a été accordée aux modifications post-synthétiques des histones. Après avoir mis au point un protocole permettant l'obtention de grandes quantités d'histones pures, nous avons utilisé une partie de celles-ci pour la préparation de grands fragments. Les histones h3 et h4 ont pu d'autre part être fractionnées selon leur degré d'acétylation (acétylation post-traductionnelle des fonctions epsilon-amine des lysines) par deux méthodes de chromatographie d'échange d'ions. L'une est effectuée à pH 6,8 en milieu réducteur à partir d'un mélange d'histones h3 et h4. Les histones sont élues sous forme de complexes h3-h4, dans l'ordre décroissant de leur degré d'acétylation. L'autre méthode qui procède à partir d'une histone isolée est moins douce (urée 6m, pH 3) mais conduit à la séparation totale des sous-espèces de l'histone h4. Tout ce matériel a été utilisé pour des études biochimiques, biophysiques et immunologiques, ce qui a permis notamment les observations qui suivent : les propriétés antigéniques sont liées à la structure secondaire. Les zones en hélice des histones sont essentielles dans la stabilisation de l'ADN en forme b. Le comportement in vitro des histones h3 et h4 dépend étroitement du variant d'histone h3 considère et du milieu. Les particules, reconstituées à partir d'histones acétylées, ou non acétylées, apparaissent semblables en microscopie électronique et en dichroïsme circulaire, mais différent quelque peu par leurs propriétés antigéniques. L'acétylation de l'histone h4 se fait dans un certain ordre, cet ordre dépend du processus cellulaire dans lequel elle est impliquée