Thèse soutenue

La cellulase CelF : un composant majoritaire du cellulosome de Clostridium cellulolyticum
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Auteur / Autrice : Corinne Reverbel-Leroy
Direction : Jean-Pierre Belaich
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie cellulaire, biologie structurale et microbiologie
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Aix-Marseille 1

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Clostridium cellulolyticum, bacterie anaerobie stricte mesophile a gram positif, secrete des complexes multiproteiques, appeles cellulosomes, qui lui permettent de se multiplier sur cellulose comme seule source de carbone et d'energie. Les cellulases, composants majoritaires des cellulosomes, ont ete divisees en deux categories: les endocellulases (qui coupent au hasard a l'interieur des chaines) et les exocellulases (qui attaquent a partir d'extremites et poursuivent leur degradation en glissant le long des chaines, selon un mode processif). Un fragment d'adn, contenant un ensemble de genes ('celf, celc, celg, cele') codant pour des elements du cellulosome de c. Cellulolyticum, a ete isole et sequence en 1992. Le travail de cette these a debute par le clonage de l'integralite du gene celf par la technique de pcr inverse. Ce travail a egalement permis d'identifier en amont de celf, le gene cipc codant pour la proteine d'assemblage du cellulosome. Le gene celf a ete place dans le vecteur d'expression pet22b(+) afin de produire dans e. Coli une proteine fusion recombinante portant a son extremite c-terminale une queue de 6 histidines, permettant une purification simplifiee de la proteine heterologue. L'activite enzymatique de la proteine purifiee a ete mise en evidence sur divers substrats cellulosiques et son mode de fonctionnement a ete caracterise comme etant de type processif. Neanmoins, plusieurs experiences ont montre que l'attaque de celf sur les chaines de cellulose se faisait selon un mode endo. Celf a alors ete appelee une endocellulase processive. Une nouvelle classification des cellulases en endocellulases d'une part et cellulases processives d'autre part, a ete proposee. La fabrication d'anticorps polyclonaux contre la proteine recombinante a permis d'identifier la proteine celf au niveau des structures cellulosomales parentales de la clostridie. Celf constitue l'un des trois composants majeurs du cellulosome. De plus, l'interaction de celf avec le facteur d'assemblage cipc, ou une forme recombinante tronquee minicipcl, a ete etudie. Des etudes preliminaires de cooperation entre celf et les differentes cellulases recombinantes purifiees au laboratoire ont revele des synergies d'action sur cellulose. Enfin, la cristallisation de la proteine recombinante celf a ete realisee