Caractérisation, purification et identification de trois protéines appartenant au site de liaison des antioestrogènes : "abs"

par Fabienne Mesange

Thèse de doctorat en Chimie des biomolécules

Sous la direction de Jean-Charles Faye.

Soutenue en 1995

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    Bien que son mecanisme d'action soit le sujet d'importantes controverses, le tamoxifene est actuellement, apres le 5-fluorouracile, l'anticancereux le plus utilise. S'il est connu que cette molecule triphenylethylenique exerce une partie de ses effets en entrant en competition avec l'stradiol sur le recepteur des strogenes (kd=5 nm), il est egalement capable de se lier avec un grand nombre de proteines intracellulaires. En 1979, la proteine presentant la plus haute affinite pour le tamoxifene (kd=3 nm) a ete appelee abs pour antiestrogen binding site. Nous nous sommes plus particulierement attaches a identifier cette proteine membranaire. La premiere etape a consiste en la synthese d'une nouvelle famille de molecules specifiques d'abs, ne se liant plus au recepteur des strogenes. Nous avons en outre pu montrer que ces produits presentaient la capacite d'inhiber la proliferation de lignees cellulaires de cancer du sein et la replication du retrovirus hiv-1 dans des lymphocytes humains infectes. La structure de ces molecules a servi de base a l'elaboration de sondes susceptibles d'etre photoactivables et rendues radioactives avec haute activite specifique dans le but de purifier abs. La purification de cette proteine membranaire dans le foie de rat (tissu ou elle est presente en forte concentration) a ete realisee a l'aide des etapes suivantes: solubilisation, separation par isoelectrofocalisation en conditions non denaturantes, photomarquage a l'aide de la sonde radioactive, precipitation des proteines puis separations successives sur differents gels de polyacrylamide. Trois proteines pures radioactives ont ainsi ete isolees. Le sequencage de plusieurs de leurs peptides a conduit a l'identification de la carboxylesterase (pm=60000 da), de l'epoxyde hydrolase (pm=53000 da) et de la proteine de liaison des acides gras: fabp (pm=15000 da). Le clonage par rt-pcr des adn complementaires codant pour ces trois proteines a ete realise. En surexprimant ces proteines dans des cellules cos et en inhibant leur synthese a l'aide d'oligonucleotides anti-sens, nous avons pu mettre en evidence leur implication dans l'activite de liaison d'abs vis a vis du tamoxifene. L'identification de ce site de liaison est une etape cle pour la comprehension du mecanisme d'action des anticancereux et l'elaboration de nouveaux agents a forts pouvoirs antitumoral et anti-retroviral

  • Titre traduit

    Characterisation, purification and idendification of three proteins belonging to abs, the antiestrogen binding site


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Informations

  • Détails : [16]-260 f

Où se trouve cette thèse\u00a0?

  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1995TOU30221
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