Reconnaissance et coupures spécifiques d'ADN double brin à l'aide d'oligonucléotides ou de PNA porteurs d'une nucléase chimique

Cleavage of double-stranded dna by hybrid molecules oligonucleotide-metalloporphyrin or pna-metalloporphyrin

• Auteur / Autrice : Pascal Bigey
• Direction : B. MEUNIER
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie des biomolécules
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

ADN

Transcription génétique

Traduction génétique

Expression génique

Analyse

Acides nucléiques

Résumé

Une premiere partie de ce travail est consacre a la synthese de differentes porphyrines cationiques de fer(iii) ou de manganese(iii), et a leur caracterisation precise par spectrometrie de masse par electrospray. Ces composes, qui sont des nucleases chimiques artificielles efficaces, sont ensuite couples sur des oligonucleotides ou des pna fonctionnalises par des fonctions amine primaire (les pna etant des analogues d'oligonucleotides possedant un squelette peptidique neutre). Les molecules hybrides oligonucleotide-metalloporphyrine (ou pna-metalloporphyrine) obtenues possedent une partie de reconnaissance de l'adn double brin (l'oligonucleotide ou le pna), et une nuclease chimique (la metalloporphyrine). L'objectif suivant a ete d'hybrider dans le grand sillon de l'adn ces molecules hybrides, afin de former une triple helice et de degrader l'adn double brin de facon specifique. En effet, la metalloporphyrine activee par l'intermediaire d'un oxydant donneur d'atome d'oxygene, provoquera des coupures de l'adn a l'endroit de la formation de la triple helice. L'influence de la longueur et de la nature du lien entre l'oligonucleotide et la metalloporphyrine a ete etudiee. Le meilleur resultat a ete obtenu avec un lien polyamine: la spermine. Cette molecule possede une bonne affinite pour l'adn, et elle a permis d'obtenir des structures en triple helice stables jusqu'a 40c, c'est-a-dire au dessus de la temperature physiologique. Si la spermine est remplacee par une diamine aliphatique, la triple helice n'est stable que jusqu'a 30c. La degradation du fragment d'adn double brin obtenue avec le lien spermine a ete de l'ordre de 70-80%