Toxoplasma gondii : caractérisation moléculaire d'un antigène de granules denses (GRA2). Mise en évidence des promoteurs de transcription des gènes codant pour les protéines granulaires GRA1, GRA2, GRA5 et GRA6

Toxoplasma gondii : molecular characterization of the dense granule antigen gra2. Identification of the promoters of genes encoding the dense granules proteins GRA1, GRA2, GRA5 and GRA6

• Auteur / Autrice : Corinne Mercier
• Direction : André Capron
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Lille 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Toxoplasma gondii

Résumé

Au cours de ce travail, nous avons entrepris la caracterisation moleculaire de la proteine p28 ou gra2 de toxoplasma gondii. L'antigene gra2 est commun aux stades tachyzoite (stade invasif durant lequel le parasite se divise dans une vacuole parasitophore) et bradyzoite (caracterise par l'enkystement des toxoplasmes). Cette molecule stockee dans les granules denses, est secretee apres l'invasion et est detectee en association avec le reseau de tubules membranaires intravacuolaires. Le clonage et le sequencage de clones d'adnc et d'un clone d'adn genomique ont montre que le gene (1,3 kb) codant pour la proteine nommee gra2 est constitue de deux exons separes par un intron de 241 pb. La sequence en acides amines deduite de l'adnc a ete confirmee en partie par 5 sequences peptidiques issues de la proteine native purifiee par hplc. Les 23 acides amines n-terminaux de gra2 possedent les caracteristiques d'une sequence signal. Le domaine central de la chaine polypeptidique pourrait etre arrange sous forme de 2 alpha helices amphipathiques qui pourraient etre les structures responsables de l'association de gra2 aux membranes du reseau intravacuolaire. L'utilisation de peptides recombinants ainsi que de peptides synthetiques dans un systeme d'elisa direct ont permis de montrer que la proteine gra2 contient au moins 3 epitopes b reconnus par les serums humains d'infection chronique et aigue. Un des epitopes, constitue des 15 acides amines c-terminaux, est aussi reconnu par l'anticorps monoclonal de souris tg17-179. Le meme systeme d'expression, applique a la proteine de granules denses gra1, a permis de souligner l'interet diagnostique de ce dernier composant. Afin de mettre en evidence les promoteurs de transcription des genes de granules denses, les regions 5 des genes gra1 (379pb), gra2 (276pb), gra5 (3205pb) et gra6 (265pb) ont ete clonees devant le gene bacterien codant pour la chloramphenicol acetyl transferase bacterienne. Ces regions permettent l'expression d'une activite cat apres transfection transitoire du toxoplasme. L'analyse de mutants de deletion a permis de localiser les regions promotrices des genes gra dans le proche environnement du site de demarrage de la transcription (-107 a -47 pour gra1, -73 a -37 pour gra2, -51 a -13 pour gra5, -85 a -27 pour gra6). L'analyse de la sequence de ces regions promotrices a mis eu evidence la presence d'un motif caat (-76 a -71) en amont du gene gra1 et de 2 motifs repetes et riches en purines (a/tgagacg) en amont des 4 genes. La transfection de constructions hybrides dans lesquelles les regions 5 non traduites des genes gra1 et gra6 ont ete permutees, montre que ces regions participent aussi au controle de l'expression des proteines gra.