Mesure de lésions de type oxydatif de l'ADN dans les fluides biologiques et dans l'ADN isolé

Measurement of oxidative damage to dna in biological fluids and isolated dna

• Auteur / Autrice : Marie-Françoise Incardona
• Direction : Jean Cadet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie organique
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Grenoble 1

Mots clés

Mots clés libres

Biochimie analytique

Structurale et metabolique

Dna

Urine

Homme

Oxydation

Methode analyse

Chromatographie phase gazeuse

Chromatographie liquide liquide

Electrochimie

Spectrometrie masse

Hydrolyse

Stress oxydatif

Cd

Dna

Urine

Human

Oxidation

Analysis method

Gas chromatography

Liquid liquid chromatography

Electrochemistry

Mass spectrometry

Hydrolysis

Oxidative stress

Cd

Résumé

Divers facteurs (stress oxydant, exposition a divers rayonnements) peuvent engendrer des modifications des bases de l'adn. La mise au point de methodes d'analyse suffisamment fiables et sensibles nous a permis de detecter et de doser plusieurs dommages oxydatifs dans un fluide biologique (urine humaine) et dans l'adn isole. Pour cela, deux techniques ont ete respectivement mises en uvre: la chromatographie gazeuse couplee a la spectrometrie de masse (cg/sm) et la chromatographie liquide a haute performance associee a une detection electrochimique (clhp/ec). La mise au point de methodes de detection de dommages oxydatifs dans l'urine par cg/sm a ete appliquee a la 5-hydroxymethyluracile, la 5-hydroxyuracile et a leurs nucleosides. Ce travail a implique, la synthese d'etalons internes enrichis isotopiquement (#2h, #1#5n, #1#8o) pour une mesure quantitative des lesions, la mise au point de la technique d'extraction du defaut et enfin l'optimisation des parametres de cg/sm pour l'obtention d'une reponse optimale. Un deuxieme volet du travail a concerne le developpement d'une nouvelle methode d'analyse de bases modifiees utilisant une colonne chromatographique a phase normale (nh#2) couplee a un detecteur electrochimique. Celle-ci nous a permis de detecter plusieurs molecules hydrophiles (5-hydroxyuracile, 5-hydroxycytosine, 2,6-diamino-4-hydroxy-5-formamidopyrimidine et 4,6-diamino-5-formamidopyrimidine) jusqu'a present difficiles a mesurer dans les conditions usuelles (colonne c18). Nous avons applique cet outil a la recherche et au dosage de la 5-hydroxyuracile et de la 5-hydroxycytosine dans l'adn soumis a deux conditions de stress oxydant (radiations ionisantes et photooxydation sensibilisee). La recherche de ces bases oxydees dans l'adn a ete facilitee par une nouvelle methode d'hydrolyse