Le clonage des adnc complets : difficultes, perspectives nouvelles. apports pour l'etude de la regulation de l'expression de la tryptophane hydroxylase de rat

Cloning full length cdnas: difficulties and new stretegies. Contribution to the study of the regulation of the expression of rat tryptophan hydroxylase

• Auteur / Autrice : JEAN-BAPTISTE DUMAS MILNE EDWARDS
• Direction : Jacques Mallet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La tryptophane hydroxylase est une enzyme catalysant l'etape limitante de la synthese de la serotonine. Le clonage, chez le rat, des adn complementaires correspondant au messager codant cette enzyme avait mis en evidence la presence de deux messagers differents par leurs extremites 5' non traduites. Compte tenu de l'abondance de l'une des formes il est impossible de l'isoler en utilisant les methodologies existantes. Nous avons developpe une nouvelle strategie de clonage basee sur la ligature d'un oligonucleotide a l'extremite 3' des adn complementaires ce qui facilite leur isolement par amplification en chaine in vitro. Ce procede a ete brevete. Des strategies nouvelles permettant d'obtenir des adnc complets ont ete testees et sont encore en cours d'elaboration. En particulier nous experimentons une methode pour etiqueter directement l'extremite 5' des arnm apres leur decoiffage. Les arnm tph, en plus des deux extremites 5' ont 3 extremites 3' pour une meme partie codante. Pour determiner l'influence de ces differentes sequences sur la traductibilite et la stabilite des messagers, nous avons construits et exprimes in vitro les 6 formes d'arnm