Chromatographie en phase liquide : contribution à l'optimisation d'une séparation préparative en gradient d'élution

Phase liquid chromatography: contribution to the optimization of a preparative separation ingradient d'elution

• Auteur / Autrice : Mohamed El Khabchi
• Direction : Jean-Louis Rocca
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Analyse physico-chimique. Chimie analytique
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean-Louis Rocca

Mots clés

Mots clés contrôlés

Solvants

Réactions chimiques -- Mécanismes

Chromatographie en phase liquide

Résumé

Le gradient d'elution est depuis longtemps une technique analytique de choix en chromatographie a polarite de phase inversee. Ses principaux domaines d'application sont l'analyse des melanges complexes et la separation des biopolymeres (peptides, proteines). Par contre, le developpement du gradient d'elution a l'echelle preparative n'est qu'a ces debuts et l'optimisation de ses performances necessite une meilleure comprehension des phenomenes qui regissent la separation dans des conditions de surcharges. Cette etude a ete realisee a partir de chromatogrammes theoriques obtenus par craigsim, un algorithme developpe au laboratoire qui permet de simuler les profils d'elution correspondant a l'injection d'un melange binaire. Ces simulations n'ont revele aucun phenomene inattendu associe a la surcharge de la colonne et aux interferences entre solutes. Il faut simplement souligner qu'en gradient d'elution, les effets de deplacement et d'entrainement sont beaucoup plus intenses qu'en elution isocratique. L'intensite relative de ces deux effets depend du type du melange a separer et de sa composition; elle conditionne aussi l'optimisation des conditions d'injection: il existe une concentration optimale d'injection tres marquee lorsque le phenomene d'entrainement est preponderant c'est-a-dire dans le cas d'un melange majoritaire/minoritaire de solutes convergent. L'etude des variations de ces conditions optimales d'injection en fonction, d'une part, des caracteristiques de la colonne (volume mort, nombre de plateaux theoriques), d'autre part, des conditions d'elution (composition de la phase mobile initiale, pente du gradient) a permis de definir un protocole de transposition analytique preparative dont la mise en uvre a ete illustree par quelques exemples. Enfin nous avons examine les performances du fractionnement a la vallee afin de degager ses meilleures conditions d'application en chromatographie liquide preparative de laboratoire