Contribution a l'etude du systeme neuroendocrine de la moule mytilus edulis

par KRISTELL KELLNER COUSIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Michel Mathieu.

Soutenue en 1993

à Caen .

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  • Résumé

    Dans le cadre de ce travail, l'etude du systeme neuroendocrine de la moule mytilus edulis a ete envisagee sous plusieurs aspects qui definissent les quatre grandes parties de la these: dans une premiere partie est decrit le travail de preparation et de caracterisation d'anticorps monoclonaux (acmc) specifiques de ganglions cerebroides (gc) de mytilus edulis. Le developpement de techniques de preparation d'acmc diriges contre des antigenes non purifies a en effet permis de produire un ensemble de reactifs de type acmc diriges contre differents antigenes issus d'un broyat de gc de moule. La specificite de ces acmc a ete etudiee en microscopie optique puis electronique selon des techniques immunocytochimiques (immunoperoxydase indirecte et immunogold). La recherche de neuropeptides circulant dans l'hemolymphe, soit sous forme libre, soit fixes sur des hemocytes a ete envisagee en criblant les acmc en immunofluorescence ou par immunodosage enzymatique (elisa). L'elisa a ete mis au point sur un extrait de ganglions cerebroides de moule puis applique sur de l'hemolymphe filtree afin d'identifier les anticorps specifiques d'epitope libres; les anticorps marqueurs d'epitopes presents sur les hemocytes ont ete identifies en immunofluorescence sur primocultures d'hemocytes. La possibilite d'un effet direct des neurosecretions sur les hemocytes a ete prise en compte: un test biologique in vitro permettant d'evaluer les capacites phagocytaires des hemocytes est disponible chez la moule; il consiste a mesurer la chimioluminescence emise par une suspension hemocytaire en presence d'un extrait de gc et permet d'aborder les interactions entre les interactions entre les systemes neuroendocrine et immunitaire. Les tous premiers elements de cette etude ont mis en evidence un net effet inhibiteur des ganglions sur l'activite phagocytaire des hemocytes. Les resultats de cette caracterisation des specificites des differents acmc ont permis de selectionner les anticorps les plus adaptes a la purification future de neurosecretions par immunoaffinite. Parmi les anticorps monoclonaux produits et caracterises, l'un d'entre eux (acmc 46) presentait un profil en immunoperoxydase sur coupe de ganglions particulierement interessant par comparaison aux profils obtenus avec differents anticorps anti-insuline d'autres invertebres. Or chez les mollusques, les molecules de type insuline sont particulierement interessantes puisqu'elles semblent etre impliquees dans les mecanismes lies a la croissance. Chez le moule un biotest actuellement disponible permet de caracteriser les facteurs neurohormonaux impliques dans la croissance en mesurant leur effet sur l'incorporation d'acides amines marques dans des cellules de bords de manteaux. Apres fractionnement de l'extrait ganglionnaire par hplc en fonction du poids moleculaire, deux fractions ont montre un fort effet activateur de l'incorporation d'acides amines. La premiere correspondait a des molecules de pm egal a 1000 da; la seconde correspondait a des molecules eluees en meme temps que l'insuline. Par ailleurs, cet effet a ete inhibe lorsque l'extrait ganglionnaire etait mis en presence de l'acmc 46. La recherche de genes correspondant a des proteines de type insuline a fait l'objet de la quatrieme partie de cette these. Cette recherche a ete abordee selon deux techniques fondees sur l'existence de zones d'homologies entre les genes identifies chez plusieurs especes d'invertebres. La premiere de ces techniques consiste a amplificier in vitro des regions de ces genes. Les sequences amplifiees par pcr sont ensuite clonees et sequencees puis comparees aux sequences connues. Cette technique permet d'acquerir rapidement des informations precises, mais reste aleatoire quant aux resultats obtenus. Aussi, une deuxieme technique, plus longue a mettre en uvre mais generalement moins aleatoire a-t-elle ete utilisee: une banque d'adnc de ganglions de moules a ete construite puis criblee avec des oligonucleotides consensus degeneres prepares a partir de sequences connues apparentees a l'insuline. Cette banque, desormais disponible, permettra dans l'avenir, d'identifier des transcrits codant pour des precurseurs impliques dans le controle neuroendocrine des processus physiologiques de mytilus edulis

  • Titre traduit

    Contribution to the study of neuroendocrine system of the mussel mytilus edulis


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  • Détails : 162 P.
  • Annexes : 177 REF.

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  • Cote : 1993CAEN2051
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