Etude de la régulation des gènes P10 et polyedrine du baculovirus d'autographa californica et développement de nouveaux vecteurs pour l'expression de gènes étrangers

Investigation of the regulation of P10 and polyhedrin genes of the autographa californica baculovirus and decelopement of new vectors for expressing foreign genes

• Auteur / Autrice : Hassan Chaabihi
• Direction : Gérard Devauchelle
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (1969-2011)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Expression génique

Baculoviridés

Résumé

Suivant le modele largement etudie du gene de la polyedrine, nous avons developpe un systeme d'expression de sequences etrangeres en utilisant le promoteur du gene p10 du baculovirus d'autographa californica. La construction d'un virus produisant des polyedres grace a une polyedrine synthetisee sous le controle de ce promoteur a permis de disposer d'un outil pratique pour selectionner des recombinants de type p10. Pour verifier si le nouveau systeme etait fonctionnel, quelques genes heterologues ont ete inseres et leur expression a ete etudiee. A la suite de ces travaux, la possibilite d'une competition entre les genes de la p10 et de la polyedrine lors de leur expression simultanee dans les cellules infectees a ete envisagee. L'existence de cette competition a ete prouvee en etudiant des virus dits a promoteur fort unique, qui sont deletes de l'un ou l'autre des deux genes. L'analyse de ces virus montre qu'il est possible d'augmenter la transcription a partir du promoteur polyedrine lorsqu'il y a deletion du promoteur p10. Par contre, aucune stimulation de l'activite transcriptionnelle du promoteur p10 n'est observee apres deletion du promoteur polyedrine. Un facteur limitant controlerait l'activite du promoteur p10, sa nature reste encore a definir. Les deux promoteurs forts du baculovirus seraient donc controles de maniere differente. Dans tous les cas d'expression de genes etrangers, il faut souligner l'importance de la nature des sequences exprimees, du contexte de leur insertion et du promoteur du baculovirus utilise. En exploitant le nouveau systeme de selection de virus recombinants de type p10, nous avons egalement construit un vecteur d'expression multiple produisant deux proteines etrangeres differentes. Ce vecteur porte une sequence heterologue en aval de chacun des deux promoteurs forts du baculovirus. Enfin, l'etude moleculaire de la regulation du gene p10 a ete abordee. Par des experiences de retardement de migration sur gel, un facteur nucleaire de cellules non infectees se fixant de maniere specifique sur un fragment d'adn contenant la region promotrice du gene p10 a ete detecte. D'autre part, un phenomene d'auto-regulation de l'expression du gene p10 a ete mis en evidence