Etude de la repararion des lesions induites par les radiations ionisantes dans l'adn : isolement et caracterisation du mutant radc d'escherichia coli k-12, clonage de ce gene et identification de la proteine radc

Dna repair of ionising radiations damages: isolation and characterization of escherichia coli k-12 radc mutant, cloning of this gene and identification of the radc protein

• Auteur / Autrice : ISRAEL FELZENSWALB
• Direction : Paul Cohen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La mutation radc sensibilise les cellules aux rayons x, uv et aux agents alkylants, le mutant radc a une mutagenese induite par les rayons gamma normale et une mutagenese induite par la radiation uv moins importante que celui de la souche sauvage, un taux normal de degradation de l'adn induite par les radiations x et uv et enfin une deficience en recombinaison. La souche radc est normale pour la reactivation par la cellule hote du bacteriophage lambda irradie. La mutation radc ne sensibilise pas une souche reca, mais sensibilise les souches rada et pola aux radiations x et uv et une souche uvra aux rayonnements uv. Le mutant radc effectue normalement la reparation des cassures simple brin de l'adn quand il est incube dans du tampon. Neanmoins, il est partiellement defectueux dans la reparation des lesions additionnelles que la souche sauvage effectue quand elle est incubee dans un milieu riche. La mutation radc a ete localisee entre les genes fpg et pyre a 81. 7 min dans le chromosome bacterien. E. Coli bh20 (radc#+, fpg-1:kn#r) montre un fragment d'adn eco ri/kpn i de 10. 5 kb qui contient la region de pyre jusqu'a l'insertion fpg-1:kn#r. La region complementaire a radc102 a ete localisee dans un fragment bgl ii/bgl ii d'adn de 1. 2 kb qui a ete sequence. La sequence a montre un atg, codon d'initiation, avec un cadre ouvert de lecture de 297 pb. La mutation radc a ete identifiee comme une deletion (-1), causant une mutation frameshift. L'ordre des genes dans cette region du chromosome d'e. Coli est fpg (mutm) - rpmbg - radc -dut - pyre - recg. Le clonage du gene radc dans un vecteur d'expression procaryotique a permis l'identification de la proteine radc par la methode de maxicell. Une bande de 11 kdal, correspondant au polypeptide prevu par la sequence du gene radc a ete identifiee par electrophorese