Membrane transport studies of sialic acids donors to the glycosylation site

Étude du transport membranaire des donneurs d'acides sialiques aux sites de glycosylation

• Auteur / Autrice : Anne Harduin-Lepers
• Direction : André Verbert
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Lille 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Appareil de Golgi

Transport biologique

Acides sialiques

Biosynthèse

Glycoconjugués

Résumé

La biosynthèse des glycoconjugués met en jeu un donneur de sucre, une structure acceptrice et des enzymes spécifiques (les glycosyltransférases). Dans la cellule eucaryote, elle est organisée au sein d'un système membranaire allant du reticulum endoplasmique rugueux aux vésicules golgiennes. Ces membranes intracellulaires séparent le milieu cytoplasmique contenant les glycosyl-nucléotides (les donneurs de sucre dans la réaction de glycosylation), de la lumière de ces organites ou se trouvent les produits de la glycosylation. Cette ségrégation des molécules glycosylées pose immédiatement le problème du passage des précurseurs vers le lieu de glycosylation. Notre objectif a été d'élucider les mécanismes de transport des donneurs d'acide sialique aux sites de sialylation. Nous avons mis au point une technique simple et rapide de perméabilisation des cellules fibroblastiques CHO (Chinese Hamster Ovary) par congélation-décongélation rendant la membrane plasmique perméable au cmp-neu5ac sans affecter la perméabilité des vésicules intracellulaires. Ce modèle des cellules perméabilisées nous a permis de montrer qu'il existait un phénomène de transport pour le CMP-Neu5Ac en appliquant les critères de mise en évidence des transporteurs qui mettent en jeu des composants membranaires sensibles aux variations de la température, saturable en présence d'un excès de substrat et inhibés par des analogues de substrat. Nous en avons précisé le fonctionnement : ce phénomène correspond à un transport actif secondaire encore dénommé antiport, permettant un échange spécifique entre le CMP et le CMP-Neu5Ac. L'utilisation de vésicules golgiennes purifiées de cellules CHO nous a permis d'étudier cet antiport sans interférence avec le métabolisme cellulaire. D'autre part, il a été observé que le CMP-Neu5Ac, un dérivé du CMP-¨Neu5Ac synthétisé dans le cytoplasme, était particulièrement abondant sur les glycoconjugués de foie