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des thèses françaises
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Production, caractérisation et applications d'anticorps monoclonaux dirigés contre l'histone H1(0)
| Auteur / Autrice : | Sandrine Dousson |
| Direction : | Jean-Jacques Lawrence |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Biologie |
| Date : | Soutenance en 1990 |
| Etablissement(s) : | Grenoble 1 |
Mots clés
Résumé
Des anticorps monoclonaux anti-histone h1#0 de buf ont ete produits et caracterises. Les souris ont ete immunisees avec l'histone h1#0 purifiee, libre ou complexee a de l'arn de transfert de levure. Treize cultures d'hybridomes, d'origine clonale differente, ont ete selectionnees. Ces anticorps (exceptees trois igm), appartiennent a la classe des igg1 et ont une chaine legere kappa. Des experiences d'immuno-blot, utilisant des peptides issus du clivage des histones h1#0 et h5 par differents agents proteolytiques (trypsine, n-bromosuccinimide, bromure de cyanogene, acide acetique), ont montre que onze anticorps reconnaissaient la partie globulaire de l'histone h1#0. Deux anticorps reconnaissent l'histone h1#0 entiere ainsi que les histones de la particule cur, mais aucun des peptides issus des clivages de h1#0. L'epitope correspondant est probablement conformationnel. Une caracterisation plus poussee des epitopes situes a l'interieur de la partie globulaire, pour les onze autres anticorps, nous a permis de mettre en evidence trois regions differentes impliquees dans la reconnaissance antigenique. Trois anticorps, specifiques de l'histone h1#0, reconnaissent les residus 24-27. Six anticorps reconnaissent les residus 27-30 et sont specifiques de l'histone h1#0, excepte l'un d'entre eux qui donne de fortes reactions croisees avec l'histone h5 et sa partie globulaire. Deux anticorps, specifiques de h1#0, reconnaissent les residus 31-52. Dans le but de confirmer la localisation des residus essentiels a la reconnaissance antigenique de deux des regions impliquees, un decapeptide a ete synthetise (residu 19-28). Des experiences de competition avec ce peptide couple a la serum albumine bovine, ont ete effectuees pour les differents anticorps. Ces anticorps sont des outils tout a fait performants pour la technique d'immunofluorescence sur cellules fixees, pour etudier d'une part les variat