Étude préliminaire d'une nouvelle approche analytique pour la conception d'un dispositif automatique de séquençage de l'ADN

par Bertrand Grimm

Thèse de doctorat en Biotechnologie analytique

Sous la direction de Quy Dao Nguyen.

Soutenue en 1990

à Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris .

mots clés

• ADN

Résumé

Les méthodes habituelles de séquençage de l’ADN (marquage radioactif ou fluorescent) présentent des limitations en rapidité et en possibilité d'évolution. Nous proposons une technique utilisant le marquage par des isotopes stables, l'ionisation par laser et la détection des ions par spectrométrie de masse à temps de vol. Les avantages de cette méthode sont nombreux : éventail des marqueurs, rapidité d'analyse et sensibilité. Actuellement, les seules méthodologies connues d'accès au séquençage sont celles de Sanger et de Maxam-Gilbert, les fragments étant ensuite séparés par électrophorèse. Nous nous sommes intéressés à l'amélioration des performances de l'électrophorèse et a son couplage avec le spectromètre de masse. Les résultats que nous avons obtenus sont préliminaires. En ce qui concerne l'électrophorèse, nous avons amélioré d'un facteur trois la rapidité de séparation des fragments. Cela ne semble pas être la limite des possibilités de l'électrophorèse, mais il faut être attentif à la chute de résolution. Nous avons aussi conçu et réalisé deux dispositifs de couplage. Le premier permet le dépôt de fragment sur une membrane d'hybridation, l'autre les élue et les entraine dans un flux liquide, sans perte de résolution. Ce projet n'a pas encore abouti à un dispositif automatique, mais ses potentialités laissent présager que ces méthodes pourront s'adapter à toutes les méthodologies de séquençage futures.

Titre traduit

Preliminary study of a new analytical approach for the conception of an automatic device for the DNA sequencing

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