Expression de gènes d'intérêt biotechnologique sous contrôle de promoteurs de gènes de protéines de choc thermique dans les cellules eucaryotes

par Michel Dréano

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Prudent Padieu.

Soutenue en 1990

à Dijon .


  • Résumé

    Toute cellule vivante soumise à une agression extérieure réprime ses synthèses endogènes de mARN et de protéines, et surexprime un nombre limite de protéines appelées Heat schok proteins (HSP). Le promoteur HSP de la protéine 70-kda a été isolé, et inséré dans un vecteur contenant un gène d'intérêt biotechnologique. Lorsque le plasmide est introduit dans des cellules eucaryotes, la synthèse de la protéine codée par le gène est régulée de la même façon que celle des HSP endogènes. Ce système a été utilisé pour la production de différentes protéines, certaines sont sécrétées : hormone de croissance humaine (hGH), protéine d'enveloppe du virus de l'hépatite B (HBS), lysozyme de poulet (LYS), d'autres présentent une activité enzymatique : bêta-galactosidase, urokinase humaine ou de souris, et d'autres réagissent avec des protéines circulantes, soit des anticorps, soit des protéines plasmatiques, HBS et urokinase humaine et de souris. L'étude de la cellule hôte a conduit à des lignées recombinantes produisant une protéine sous contrôle du promoteur hsp70. Un autre mode d'amplification au niveau génique, le gène de la dihydrofolate reductase ou de séquences du virus du papillome bovin, n'interfère pas avec l'inductibilité du promoteur hsp. Des lignées maintiennent leur production lorsqu'elles sont cultivées dans des milieux sans serum, facilitant l'isolement de la protéine pure. La masse cellulaire peut être amplifiée par le passage en tumeur dans la souris nude. Les cellules dissociées de la tumeur et mises en culture maintiennent la même sécrétion protéique que celui des cellules parentes. L'application du choc thermique à la souris porteuse de la tumeur induit "In Vivo" la sécrétion plasmatique de la protéine recombinante, cas de l'hGH. L'injection de cellules tumorales à un animal hôte immunocompétent induit la synthèse de l'anticorps correspondant, par exemple l'ac-hGH. Dans ce cas la, même. . .

  • Titre traduit

    Expression of genes of biotechnological interest under the control of heat shock protein promoters in eukaryotic cells


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  • Cote : TDDIJON/1990/45

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  • Cote : 1990DIJOS045
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