Métabolisation de la trinitroglycérine par Phanerochaete chrysosporium et par les cytochromes P-450 des microsomes hépatiques

Studies on the metabolisation of nitroglycerin by Phanerochaete chrysosporium and by cytochrome P-450 of hepatic microsomes

• Auteur / Autrice : Denis Servent
• Direction : Guy Ourisson, Pierre Potier, Maryse Lenfant
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génie Biomédical
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Compiègne
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale 71, Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Mycélium

Champignons

Cytochrome P450

Monoxyde d'azote

Microsomes

Hépatocytes

Cellules hépatiques

Mots clés libres

Trinitroglycérine (TNG)

Bioconversion

Oxyde nitrique (NO)

Phanerochaete chrysosporium

Résumé

Nous avons étudié les mécanismes enzymatiques impliqués dans la bioconversion de la trinitroglycérine (TNG) par un champigon filamenteux : Phanerochaete chrysosporium ainsi que sa métabolisation par des extraits de cellules hépatiques. Les résultats suivants ont été mis en évidence : - Le mycelium dégrade la TNG en 2-MNG avec un rendement de 90% et une régiosélectivité de 80%. Les spectres RPE effectués au cours de l'incubation de la TNG mettent en évidence la formation de complexes hémoprotéine-NO et protéine Fe-S-NO intracellulaires. - La dégradation de la TNG par P. Chrysosporium met en jeu différents systèmes enzymatiques composés de plusieurs activités solubles et membranaires. L'activité cytosolique est constituée d'une activité glutathion-transférase et d'une hémoprotéine de type cytochrome P-450. Une hémoprotéine semble intervenir au niveau des activités liées aux membranes et plus particulièrement de type cytochrome P-450 dans la fraction microsomiale. - Des microsomes de foie de rat induit au phénobarbital interagissent avec la TNG pour donner un spectre UV-visible de type I alors qu'en anaérobie et en présence de NADPH apparaît un spectre caractéristique d'une interaction cytochrome P-450-NO. Ces microsomes dégradent la TNG en ses dérivés di et mononitrés. Parmi les inducteurs de cytochromes P-450 étudiés, la dexaméthasone augement nettement la concentration des cytochromes P-450 efficaces dans la dégradation réductive de la TNG. Ce résultat, de même que les effets d'inhibiteurs spécifiques, permet d'impliquer la forme IIIA du cytochrome P-450.

We have studied the eniymatic mechanisms involved in the bioconversion of glyceryl trinitrate (GTN) by a filamentous fungus : Phanerochaete chrysosporium and in the GTN metabolization by hepatic cells extract. The following resuits have been pointed out - The fungus degrade GTN in 2-GMN with a rate of 90% and 80% of regioselectivity. EPR spectra made during GTN incubation show the formation of intracellular complexes identified like hemoprotein-NO and protein Fe-S-NO. - The GTN degradation by P. Chrysosporium involved enzymatic systems_ constituted by soluble and membrane activities. The cytosolic activity is constituted by a glutathion-transferase and by an hemoprotein like cytochrome P-450. Hemoproteins seems to be involve in membrane activities and in particular a cytochrome P-450 in microsomal fraction. - Hepatic rat microsomes, induced by phenobarbital, interact with GTN to form a type I spectrum. In presence of NADPH and in anaerobic condition, a spectrum appeared, caracteristic of an interaction cytochrome P-450-NO. These microsomes degrade GTN in di and mononitrated derivatives. Amongst the cytochrome P-450 inducer tested, dexamethasone increases stongly the concentration of cytochrome P-450 involved in the reductive degradation of GTN. This result and the effect of specific inhibitors allow us to involve the IIIA form of cytochrome P-450.