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Thèse soutenue

Étude des mouvements intramoléculaires de la phosphoglycérate kinase par fluorimétrie impulsionnelle et minimisation d'énergie

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Auteur / Autrice : Liliane Mouawad
Direction : Jeannine Yon-Kahn
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques
Date : Soutenance en 1989
Etablissement(s) : Paris 11

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Fluorescence
Enzymes
Tryptophane

Mots clés libres

Phosphoglycérate kinase
Mobilité intramoléculaire
Minimisation énergie

Résumé

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Le déclin de fluorescence des quatre résidus tryptophane de la phosphoglycérate kinase (PGK) du muscle de cheval aux longueurs d'onde supérieures à 370nm est essentiellement caractérisé par un temps de vie de 3ns, excepté aux basses températures. La fixation du 3-phosphoglycérate n'a aucun effet sur les propriétés de fluorescence de la PGK et ne modifie pas son temps de corélation rotationnelle, qui est de 26ns à 293K. Par contre, la fluorescence des tryptophanes dans le complexe PGK-MgADP est caractérisé par deux temps de vie principaux, un prédominant de 3ns, et l'autre de 13ns avec une contribution bien plus faible. La fixation du MgADP diminue le temps de relaxation de l'anisotropie de fluorescence jusqu'à 10ns à 293K. Ce temps de corrélation ne peut pas correspondre à celui de la rotation de la protéine entière (26ns), mais il pourrait être dû à la rotation du seul tryptophane enfoui (Trp335) qui serait facilitée par un changement conformationnel induit par la fixation du nucléotide. Afin de vérifier cette hypothèse, les trajectoires de rotation du Trp335 en présence et en absence du nucléotide ont été établies par calcul de minimisations d'énergie. Les résultats indiquent que le MgADP induit un déplacement de l'hélice 13 qui diminue la barrière d'énergie de rotation de ce typtophane de 16Kcal/mol dans la protéine libre à 8Kcal/mol dans la protéine ligandée. Cette dernière valeur correspond à un temps de corrélation rotationnelle comparable à celui obtenu expérimentalement.