Thèse soutenue

Caractérisation génétique et physiologique du système formiate-déshydrogénase chez Escherichia coli
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Auteur / Autrice : Long Fei Wu
Direction : François Stoeber
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Laboratoire de Microbiologie
Date : Soutenance en 1988
Etablissement(s) : Lyon, INSA
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : MIC – Microbiologie, RA 177 (INSA, Lyon)

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Le système anaérobie formiate-hydrogènelyase catalyse la production de l’hydrogène et du gaz carbonique chez Escherichia coli. Il contient une formiate déshydrogénase liée au viologène de benzyle (FDH-BV), une hydrogénase et un intermédiaire de transport d'électrons. Nous avons obtenu deux groupes de mutants dépourvus spécifiquement d'activité FDH-BV : fdhF et fdv, localisés respectivement aux minutes 93 et 58 sur le chromosome d'E. Coli. L'expression du gène de structure fdhF est contrôlée positivement par fdv et quatre autres gênes impliqués dans l'activité formiate-hydrogènelyase : fdhA, fdhB, fdhC et hydB12. La carte des sites de restriction et le sens de transcription gêne fdhF cloné ont été établis par digestion aux endonucléases et par insertion du phage miniMudII. Le gêne fdhF code pour un polypeptide de 85-kDa, identifié dans le système maxi cellule. Quatre groupes de mutants déficients en activité hydrogénase ont aussi été isolés. Les mutations correspondantes se situent aux minutes 58 (pour hydA, B et E) et 77 (pour hydC). Le phénotype négatif des mutants hydC peut être supprimé-par addition spécifique de nickel dans le milieu de croissance. Cette restauration dépend de la biosynthèse protéique. Le clonage de. La région hydC a permis de la différencier en deux loci qui produisent trois polypeptides de taille 28,5 - 46,5 et 59 kDa dans le système ARN polymérase/ promoteur du phage T7. Enfin, l'analyse de l'expression de la région hydC démontre que le gène régulateur général anaérobie nirR contrôle la synthèse de l'hydrogénase par l'intermédiaire de hydC qui intervient dans une (ou des) étape(s) essentielle(s) du métabolisme cellulaire du nickel.